Diversos estudos têm demonstrado a importância das células do microambiente na regulação da proliferação, invasão e progressão tumoral. Assim, células mioepiteliais benignas presentes no carcinoma ex-adenoma pleomórfico, as quais circundam as células epiteliais luminais malignas, estão envolvidas na progressão dos tumores, regulando a transição de carcinoma in situ para invasivo, nos quais se observa o desaparecimento destas células durante o processo de invasão tumoral. Dessa forma, este trabalho objetivou estudar como este fato ocorre, analisando a expressão de proteínas reguladoras da apoptose, autofagia e senescência celular em um modelo in vitro que mimetiza uma condição tumoral in situ, durante a evolução do processo neoplásico. Neste modelo, células de carcinoma epidermoide apresentavam-se envoltas por células mioepiteliais benignas de adenoma pleomórfico, colocadas sobre a proteína fibronectina. Assim, avaliou-se qualitativamente, por meio da técnica de imunofluorescência indireta, a expressão das proteínas da apoptose (Bax, Bcl-2, Survivin), da autofagia (Beclin-1, LC3B) e da senescência (p21, p16), e por reação histoquímica, a expressão da enzima ?-galactosidase, nestas áreas simuladoras da condição in situ, em diferentes tempos de cultivo celular, assim como nas populações celulares isoladamente. Além disso, avaliou-se em biópsia de CXAP, a expressão dos marcadores p21 e p16. Os resultados demonstraram que as proteínas da apoptose Bax, Bcl-2 e Survivin e a proteína da autofagia, Beclin-1 foram positivas somente nas células carcinomatosas em todas as condições e tempos experimentais. Já a proteína LC3B foi imunoexpressa pelas células mioepiteliais e de carcinoma epidermoide, em todas as condições e períodos de estudo. Os marcadores p21 e p16, tanto nas células estudadas isoladamente, quanto no modelo in vitro, foram positivos no citoplasma das células de carcinoma epidermoide, enquanto o p21 mostrou marcação nuclear nas células mioepiteliais. Porém, in vivo, estas células expressaram também, no seu núcleo o p16. As células luminais malignas do CXAP foram positivas para o p21 no seu núcleo e citoplasma. A atividade da enzima ?-galactosidase foi observada nas células mioepiteliais e sua expressão aumentada conforme progressão dos tempos experimentais no modelo de tumorigênese in situ. Estes achados sugerem que, neste modelo, os processos de autofagia e senescência celular contribuem para o desaparecimento das células mioepiteliais, e consequentemente para a proliferação das células malignas e progressão tumoral.
Palavras-chave: Microambiente tumoral. Células mioepiteliais. Apoptose. Autofagia. Senescência celular.

Several studies have highlighted the importance of the cells present in the microenvironment for the regulation of tumor cell proliferation, invasion and progression. Benign myoepithelial cells of carcinoma ex-pleomorphic adenoma (CXPA), which surround the malignant epithelial cells, are involved in the progression of these tumors, regulating the transition from in situ to invasive carcinoma, and may dissapear during tumor invasion. Therefore, the aim of this study was to investigate the mechanism involved in myoepithelial cells dying and disappearing, by analyzing the expression of regulatory proteins of apoptosis, autophagy and cellular senescence in an in vitro model that mimics an in situ neoplastic process. In this model, malignant squamous cell carcinoma cells were surrounded by benign myoepithelial cells from pleomorphic adenoma on fibronectin substratum. The expression of proteins relating to apoptosis (Bax, Bcl-2, Survivin), autophagy (Beclin-1, LC3B) and cellular senescence (p21, p16) was qualitatively evaluated by indirect immunofluorescence. The expression of the ?-galactosidase enzyme in these in situ neoplastic areas was performed using histochemistry reaction in different periods and using the isolated cell types as controls. Furthermore, the expression of p21 and p16 markers was assessed in a CXAP biopsy. The results demonstrated that apoptosis-related proteins, Bax, Bcl-2 and Survivin and the autophagy protein, Beclin-1, were positive only in the malignant cells of squamous cell carcinoma in all studied conditions and periods. The LC3B protein was immunoexpressed in myoepithelial and carcinoma cells. p21 and p16 markers presented cytoplasmatic expression in the carcinoma cells, both in isolation and in the in vitro model, whereas myoepithelial cells presented nuclear expression for p21. In vivo, however, these cells also expressed nuclear p16. The malignant epithelial cells from CXAP presented nuclear and cytoplasmatic expression for p21. ?-galactosidase activity was observed in myoepithelial cells and its expression was increased with time in the in situ tumorigenesis model. These findings suggest that, in this in vitro model, the processes of autophagy and cellular senescence contributed to the disappearance of myoepithelial cells and therefore, promoted malignant cell proliferation as well as tumor progression.
Keywords: Tumor microenvironment. Myoepithelial cells. Apoptosis. Autophagy. Cellular senescence. Ver menos