O carcinoma epidermoide (CE) é a neoplasia maligna mais comum das estruturas bucais, podendo invadir e destruir os ossos maxilares. Atualmente, além das alterações genéticas, muitos estudos têm destacado o papel da autofagia como um importante mecanismo no desenvolvimento de diversas neoplasias, incluindo o CE oral. Este mecanismo biológico pode ser modulado por diferentes moléculas, entre elas, a osteopontina (OPN). A expressão de OPN tem sido relacionada à maior agressividade de neoplasias por favorecer fenômenos celulares de adesão, proliferação e invasão. No tecido ósseo, a OPN representa a proteína mais abundante da matriz não colágena, sendo essencial para a adesão e funções de osteoblastos e osteoclastos. A OPN secretada por osteoblastos afeta as interações entre células epiteliais neoplásicas malignas, osteoblastos e osteoclastos, possivelmente contribuindo para a progressão de lesões ósseas do CE oral. Entretanto, o papel da OPN derivada de osteoblastos sobre o processo de autofagia em CE oral não é conhecido. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo analisar o efeito in vitro da OPN derivada de osteoblastos sobre o processo de autofagia em células de CE oral humano. Para isto, células epiteliais neoplásicas malignas derivadas de CE oral (SCC9) foram plaqueadas sobre membranas de Transwell® e cocultivadas com células osteoblásticas (SAOS-2) durante seu pico de expressão de OPN (10o dia de cultura; grupo Cocultura). Células SCC9 expostas a culturas com SAOS-2 silenciadas para OPN por RNA de interferência (RNAi; grupo Cocultura+RNAi) e células SCC9 cultivadas isoladamente (Grupo Controle) foram usadas como controles. Foram avaliados: 1) o fluxo autofágico por meio da quantificação das proteínas Beclin-1, LC3-II e p62 por Western Blotting; 2) possíveis vias de sinalização envolvidas na modulação da autofagia por Western Blotting Array; e 3) o papel da integrina ?v?3 e do receptor CD44 no processo de autofagia. A análise estatística foi realizada pelos testes Kruskal-Wallis ou Mann-Whitney (p<0,05). Os resultados indicaram que, após 4 h de cocultura, houve aumento da expressão de Beclin-1 e LC3-II e diminuição de p62 no grupo Cocultura em comparação aos grupos Controle e Cocultura+RNAi (p<0,05). Na análise pelo Western Blotting Array, notou-se aumento dos níveis de fosforilação das proteínas CREB, EGFR, c-JUN, JNK 1/2/3, Lyn, p70 S6, P38?, PLC?1, Src, RSK 1/2 e RSK 1/2/3 no grupo Cocultura em comparação aos demais grupos (p<0,05). Após bloqueio dos receptores CD44 e integrina ?v?3, foi verificado redução da expressão de Beclin-1 e LC3-II (p<0,05). Na análise do Western Blotting Array, o bloqueio do CD44 promoveu aumento da fosforilação de p53 e RSK 1/2 (p<0,05) e redução da fosforilação de Akt 1/2/3, CREB, ERK 1/2, Chk-2, c-Jun, Lyn, PRAS40, PLC?1, RSK 1/2/3, STAT5a/b, WNK1 e Beta-Catenina (p<0,05); por outro lado, o bloqueio da integrina ?v?3 resultou em aumento da fosforilação de Akt 1/2/3, HSP27, p53 e Src; e redução da fosforilação de ERK 1/2, Chk-2, Lyn, PRAS40, RSK 1/2, RSK 1/2/3 e WNK1 (p<0,05). Em conjunto, estes resultados indicam que a OPN derivada de osteoblastos promove a autofagia em células de CE oral e que os bloqueios do receptor CD44 e/ou da integrina ?v?3 podem ser considerados como potenciais estratégias terapêuticas para tratamento CE oral com invasão óssea.
Palavras-chave: Carcinoma epidermoide; Osteoblastos; Osteopontina; Autofagia. Ver menos