As bactérias desempenham um papel crucial na etiologia das doenças no sistema de canais radiculares, sendo os Enterococcus faecalis, microrganismos anaeróbios facultativos e gram-positivos comuns em infecções endodônticas refratárias. Áreas não instrumentadas dos canais radiculares podem se tornar reservatórios de microrganismos e levar ao insucesso do tratamento endodôntico com o aparecimento de lesões perirradiculares. O objetivo desse estudo foi avaliar ex vivo, a influência do comprimento de trabalho na redução do biofilme e bactérias planctônicas em canais ovais Foram utilizados 55 caninos, todas as raízes foram padronizadas em 16 milímetros, com patência e diâmetro foraminal de #30. Os caninos foram esterilizados e em seguida infectados com Enterococcus faecalis e mantidos por 21 dias para a formação do biofilme nas paredes do canal radicular. As amostras foram divididas aleatoriamente em 3 grupos (n=15/cada), conforme o comprimento do preparo dos canais radiculares: (G+1) preparo endodôntico 1 mm além do forame apical; (G0) preparo endodôntico no nível do forame apical e (G-1) preparo endodôntico a 1 mm aquém do forame apical. Cinco amostras contaminadas fizeram parte do grupo positivo. Cinco amostras contaminadas foram clivadas longitudinalmente e analisadas no microscópio eletrônico de varredura para confirmar a presença da formação do biofilme na parede interna do conduto radicular. Antes do preparo coleta inicial (S1) e após a instrumentação reciprocante (S2), utilizando nas duas coletas limas Hedstroen para promover a desagregação do biofilme. A diferença entre S1 e S2 foi utilizada para quantificar a redução das bactérias planctônicas e do biofilme intracanal nos diferentes níveis de instrumentação. A quantificação bacteriana foi realizada pela contagem de CFU/ml. Foi utilizado o teste de Wilcoxon para avaliar a diferença entre os dois grupos pareados. A quantidade de bactérias antes e depois da instrumentação foi avaliada pelo teste de Kruskal Wallis e pós teste de Tukey entre os grupos. O grupo controle negativo não apresentou nenhum crescimento bacteriano na fase S1 e S2. A média da contagem de bactérias no grupo controle positivo foi de 18,214 x 105 ± 8,868 x 105. Em S1, não houve diferença entre os grupos (P> 0,05), em S2, todos os níveis de instrumentação reduziram a carga bacteriana nos canais. G+1, G0 e G-1 apresentaram redução bacteriana de 97,81%, 97,09% e 90,19%, respectivamente. Adicionalmente, os resultados demonstraram em S2 que G+1 (0,18 x 105 ± 0.28 x 105) promoveu uma desinfecção estatisticamente maior (p<0,05) que o G-1 (0,86 x 105 ± 1.28 x 105). Já a desinfecção em G-1 foi semelhante a G0 (P <0,05). A instrumentação 1 mm além do forame e no limite foraminal, apresentaram melhores resultados na descontaminação bacteriana em relação a instrumentação 1mm aquém do forame. Ver menos